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產品名稱：食管癌細胞
英文簡稱：KYSE450 細胞

貨號：LZ-X969747
規格：T25
生長特性：貼壁

凍存培養基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

銀杏酚酸Linoleic acid；亞油酸冰凍切片半胱氨酸蛋白酶12（CASPASE-12）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內酯AMethimazole；甲巰咪唑/甲硫噻唑冰凍切片半胱氨酸蛋白酶13（CASPASE-13）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內酯BBifonazole；聯苯芐唑冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-2（CASPASE-2）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內酯CQuercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden；槲皮素-3-O-Β-D-葡萄糖-7-O-Β-D-龍膽雙糖苷冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏內酯JSesamin；芝麻素冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-4（CASPASE-4）活性原位熒光染色檢測試劑盒

銀杏雙黃酮Berbamine hydrochloride；鹽酸小檗冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-5（CASPASE-5）活性原位熒光染色檢測試劑盒

吲哚Sinomenine Hydrochloride；鹽酸青藤堿冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-6（CASPASE-6）活性原位熒光染色檢測試劑盒

隱丹參酮Phlorizin；根皮苷冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-7（CASPASE-7）活性原位熒光染色檢測試劑盒

隱綠原酸Phloretin；根皮素冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-8（CASPASE-8）活性原位熒光染色檢測試劑盒

櫻草素L-Xylose；L-木糖冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-9（CASPASE-9）活性原位熒光染色檢測試劑盒

鷹嘴豆芽素AAdenosine 3',5'-cyclophosphate/cAMP；環磷酸腺苷冰凍切片膽色素格美林（Gmelin）染色試劑盒

硬飛燕草堿Geraniin；老鸛草素冰凍切片膽色素霍爾（Hall）染色試劑盒

硬脂酸甲酯Creatinine；肌酐/肌酸酐冰凍切片膽色素普歇（Pouchet）染色試劑盒

油酸α-Naphthoflavone；α-萘黃酮冰凍切片膽色素史汀（Stein）染色試劑盒

油酸甲酯Antipyrine；安替比林冰凍切片彈性纖維（ELASTIC）馬森（MASSON）染色試劑盒
KYSE450 細胞原癌因蛋白/活化蛋白1抗體卡維丁（標準品） Moxonidine

死亡活化蛋白抗體克拉霉素（標準品） Moxonidine

角蛋白19抗體克拉維 Nepafenac

角蛋白2抗體克林霉素磷酯(標準品) Nepafenac

角蛋白4抗體克霉唑(標準品) Nicarbazin

色素b245輕鏈抗體喹乙;喹酰（標準品） Nimustine HCl(ACNU)

5號染色體開放閱讀框44抗體醌式利福平（標準品） NVP-BEZ 235

心臟特異性絲氨蛋白酶抗體拉呋替丁（標準品） Pemirolast potassium

胞漿型磷脂酶A2抗體拉米夫定(標準品) Perindopril erbumine
注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。