產品名稱：肺鱗癌細胞；SK-MES-1
英文簡稱：SK-MES-1細胞

貨號：LZ-X968353
規格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
綿羊原纖維蛋白2(FBN2)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-氨-3,5-二溴吡蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種拉丁屬名: Bacillus velezensis

綿羊胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)酶聯免疫吸附測定試劑盒 5-氨煙貝萊斯芽胞桿菌用途: 植物病原物，用于種群的遺傳學研究和炭疽病害的診斷和防治

綿羊半乳糖6硫酯酶(Gal-6S)酶聯免疫吸附測定試劑盒  5-氨煙圍小叢殼菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

綿羊血管活性腸肽(VIP)酶聯免疫吸附測定試劑盒5-氨煙鐮孢霉拉丁屬名: Winogradskyella pulchriflava

綿羊磷脂酶A2受體1(PLA2R1)酶聯免疫吸附測定試劑盒5-氨吡啶-2-羧 Winogradskyella pulchriflava 拉丁屬名: Penicillium saturniforme

綿羊免疫球蛋白G1(IgG1)酶聯免疫吸附測定試劑盒5-氨吡啶-2-羧比阿婁維扎青霉 拉丁屬名: Bacillus subtilis

綿羊色素P450家族成員1A2(CYP1A2)酶聯免疫吸附測定試劑盒 L-4-溴苯氨枯草芽孢桿菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

綿羊載脂蛋白C1(ApoC1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 L-4-溴苯氨黑腐皮殼拉丁屬名: Candida  lipolytica

綿羊蛋白17(Sp17)酶聯免疫吸附測定試劑盒L-4-溴苯氨解脂假絲酵母拉丁屬名: Saccharomyces  logos

綿羊γ谷氨酰半胱氨合成酶(γ-ECS)酶聯免疫吸附測定試劑盒4--L-苯氨洛格酵母拉丁屬名: Lentinula edodes

綿羊生存素(Surv)酶聯免疫吸附測定試劑盒代十四烷香菇注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

綿羊NOD樣受體(NLR)酶聯免疫吸附測定試劑盒代十四烷相思根瘤菌拉丁屬名: Escherichia  coli

綿羊唾液(SA)酶聯免疫吸附測定試劑盒 1,4-丁二二縮水甘油大腸埃希氏桿菌用途: 生物防治

綿羊蕈型乙酰膽受體亞型M2(M-AChRM2)酶聯免疫吸附測定試劑盒1,4-丁二二縮水甘油球孢白僵菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

綿羊神經營養因子4(NT-4)酶聯免疫吸附測定試劑盒1,4-丁二二縮水甘油釀酒酵母拉丁屬名: Streptomyces sp.

綿羊胰島素樣生長因子1(IGF-1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 1,4-丁二二縮水甘油鏈霉菌 (灰褐類群)拉丁屬名: Streptomyces coelicolor
SK-MES-1細胞雞肺部活化調節趨化因子(PARC/CCL18)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Anti-E.coli O139/Gold  膠體金離子標記抗志賀素大腸桿菌O139抗體IgG

雞上皮中性粒活化肽78(ENA-78)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Anti-E.coli O157/Gold  膠體金離子標記抗大腸埃希氏菌O157抗體IgG

雞凝血酶敏感蛋白1(TSP1)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-E.coli O157/Biotin  生物素標記抗大腸埃希氏菌O157抗體IgG

雞L-乳酸脫氫酶(L-LDH)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-Dysferlin/FITC  熒光素標記Dysferlin蛋白抗體IgG

雞5羥吲哚乙酸(5-HIAA)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Anti-EPEC/E.coli /Biotin   生物素化兔抗腸致病性大腸桿菌抗體IgG

雞脯氨酸/精氨酸豐富端亮氨酸豐富重復蛋白(PRELP)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-E.coli/Biotin   生物素化兔抗普通大腸埃希菌菌體蛋白抗體IgG

雞核有絲分裂器蛋白1(NUMA1)酶聯免疫吸附測定試劑盒Anti-E2F1/FITC  熒光素標記轉錄因子E2F-1抗體IgG

雞免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Anti-E2F2/FITC  熒光素標記轉錄因子E2F-2抗體IgG